Microarray de ADN

• revisado por el Dr. Tomislav Meštrović, MD, Ph. D.

  El microarray es una tecnología recientemente desarrollada que se utiliza en la investigación del cáncer y en el tratamiento farmacológico de otras enfermedades como las lesiones orales. En esta tecnología, se utiliza un portaobjetos de microscopio (normalmente una matriz 2D hecha de vidrio, chips de silicio o membrana de nylon) impresa con miles de puntos de minutos en posiciones definidas.

  ©DAndre Nante/.,el microarray de ADN com

  (chip genético, chip de ADN o biochip) es una tecnología que mide el ADN o utiliza el ADN como parte de su sistema de detección. En cada uno de los puntos de esta matriz, una secuencia conocida de ADN o gen está ordenada.

  en conjunto, las muestras de todos los genomas de un organismo pueden estar presentes en una sola diapositiva. A continuación, se utiliza una base de datos informática para registrar la ubicación y la secuencia de cada lugar. Estas secuencias de ADN se comparan entre sí para obtener la información necesaria., Esta técnica permite a los investigadores investigar y analizar la expresión de miles de genes en una sola reacción y abordar problemas que se cree que no se pueden rastrear.

  principio y técnica

  el principio básico detrás del microarray de ADN es la «hibridación de ácido nucleico». En este Proceso, dos hebras complementarias de un ADN se unen entre sí por enlaces de hidrógeno para formar una molécula de doble cadena. Esto ayuda a los investigadores a comparar y analizar las moléculas de ADN o ARN de secuencias idénticas.,

  la técnica consta de tres secciones principales:

  1. Preparación de un chip de ADN
  2. El experimento
  3. recopilación y análisis de resultados
  • Preparación de un chip de ADN y el experimento

  se utilizan varios métodos para preparar una matriz manchada. En algunos casos, las sondas ya diseñadas que están unidas a agujas finas se imprimen en una superficie de matriz química utilizando un robot (ingeniería de superficies). La química fotoactivada y el enmascaramiento también se utilizan para hacer sondas, y también se pueden comprar en tiendas.,

  el procedimiento de reacción del microarray de ADN tiene lugar en varios pasos:

  1. recolección de muestras – una muestra puede, en este caso, definirse como la célula/tejido del organismo sobre el que deseamos realizar el estudio. Se recogen dos tipos de muestras: células sanas y células infectadas, para la comparación y para obtener los resultados.
  2. El aislamiento de ARNm-ARN se extrae de la muestra utilizando una columna o disolvente como fenol-cloroformo. Del ARN extraído, el ARNm se separa dejando atrás el ARNr y el ARNt., Como el ARNm tiene una cola de poli-A, las cuentas de columna con colas de poli-T se utilizan para unir el ARNm. Después de la extracción, la columna se enjuaga con tampón para aislar el ARNm de las perlas. Buffer perturba los enlaces híbridos entre el ARNm y las perlas al alterar el pH.
  3. Creación de ADNc etiquetado: para crear ADNc (cadena de ADN complementaria), se realiza la transcripción inversa del ARNm. Ambas muestras se incorporan con diferentes tintes fluorescentes para producir hebras fluorescentes de ADNc. Esto ayuda a distinguir la categoría de muestra de los cDNAs.,
  4. hibridación-los cDNAs etiquetados de ambas muestras se colocan en el microarray de ADN para que cada cDNA se HIBRIDE a su hebra complementaria; también se lavan a fondo para eliminar secuencias ilimitadas.
  • recogida y análisis

  la recogida de datos se realiza mediante un escáner de microarray. Este escáner consiste en un láser, una computadora y una cámara. El láser excita la fluorescencia del ADNc, generando señales.

  Cuando el láser escanea la matriz, la cámara graba las imágenes producidas., Luego, la computadora almacena los datos y proporciona los resultados de inmediato. Los datos así producidos se analizan a continuación. La diferencia en la intensidad de los colores para cada punto determina el carácter del gen en ese punto en particular.,

• Las matrices proporcionan una medida indirecta de la concentración relativa
• especialmente para genomas de mamíferos complejos, a menudo es difícil diseñar matrices en las que múltiples secuencias de ADN/ARN relacionadas no se unen a la misma sonda en la matriz
• Una matriz de ADN solo puede detectar secuencias que la matriz fue diseñada para detectar

li> Conjunto de secuencias de ADN

técnicas de secuenciación de ADN de alto rendimiento

secuenciación de escopeta

última actualización Feb 26, 2019