les nucléases CRISPR/Cas9 ont été largement appliquées pour l’édition du génome chez divers organismes. Les nucléases Cas9 complexées avec un ARN guide (Cas9-gRNA) trouvent leurs cibles en scannant et en interrogeant l’ADN génomique à la recherche de séquences complémentaires à l’ARNg., La reconnaissance de la séquence cible d’ADN nécessite un court motif adjacent de protospacer (PAM) situé en dehors de cette séquence. Étant donné que l’efficacité de la localisation de la cible peut dépendre de la force des interactions qui favorisent la reconnaissance de la cible, nous avons cherché ici à comparer les affinités de différentes nucléases Cas9 pour leurs séquences PAM apparentées., À cette fin, nous avons mesuré les affinités des nucléases Cas9 de Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus et Francisella novicida complexées avec des ARN guides (ARN) (SpCas9-gRNA, SaCas9-gRNA et FnCas9-gRNA, respectivement) et de trois variants de spcas9-gRNA modifiés avec des spécificités PAM pour des sondes D’ADN courtes contenant PAM. Nous avons utilisé un test » beacon « qui mesure les affinités relatives des sondes D’ADN en déterminant leur capacité à affecter de manière compétitive le taux de liaison Cas9-gRNA à des dérivés d’ADN cibles marqués par fluorescence appelés » balises Cas9., »Nous avons observé des différences significatives dans les affinités pour les séquences PAM apparentées parmi les enzymes Cas9 étudiées. Les affinités relatives de SpCas9-gRNA et de ses variantes conçues pour les PAMs canoniques et sous-optimaux étaient corrélées avec les résultats précédents sur l’efficacité de ces séquences PAM dans l’édition du génome. Ces résultats suggèrent qu’une affinité élevée d’une nucléase Cas9 pour son PAM apparentée favorise une plus grande efficacité d’édition du génome.