DNS microarray

• értékelte Dr. Tomislav Meštrović, MD, Ph. D.

  a microarray egy nemrégiben kifejlesztett technológia, amelyet rákkutatásban és más betegségek, például orális elváltozások farmakológiai kezelésében alkalmaznak. Ebben a technológia, egy tárgylemezen (általában egy 2D tömb üvegből, szilícium chipek, vagy nylon membrán) nyomtatott több ezer perc foltok a határozott álláspontok használják.

  ©DAndre Nante/ .,com

  A DNS microarray (géncsip, DNS chip vagy biochip) egy olyan technológia, amely vagy méri a DNS-t, vagy a DNS-t használja az észlelési rendszer részeként. A tömb minden egyes helyén egy ismert DNS-szekvencia vagy gén rendezett.

  összességében a szervezet összes genomjának mintái egyetlen diában jelen lehetnek. Ezután egy számítógépes adatbázis segítségével rögzítik az egyes helyek helyét és sorrendjét. Ezeket a DNS-szekvenciákat összehasonlítják egymással, hogy megkapják a szükséges információkat., Ez a technika lehetővé teszi a kutatók számára, hogy egyetlen reakcióban több ezer gén expresszióját vizsgálják és elemezzék, és olyan kérdéseket kezeljenek, amelyekről úgy gondolják, hogy nem követhetők.

  elv és technika

  a DNS mikroarray mögött meghúzódó alapelv a “nukleinsav hibridizáció”. Ebben a folyamatban a DNS két kiegészítő szálát hidrogénkötésekkel egyesítik, hogy kettős szálú molekulát képezzenek. Ez segít a kutatóknak az azonos szekvenciák DNS-vagy RNS-molekuláinak összehasonlításában és elemzésében.,

  a technika három fő részből áll:

  1. DNS-chip előkészítése
  2. a kísérlet
  3. eredmények gyűjtése és elemzése
  • a DNS-chip előkészítése és a kísérlet

  több módszert alkalmaznak foltos tömb készítésére. Bizonyos esetekben a már tervezett szondákat, amelyek finom tűkhöz vannak rögzítve, egy robot (surface engineering) segítségével kémiai mátrix felületre nyomtatják. Fotoaktivált kémiát és maszkolást is használnak szondák készítéséhez, és ezeket üzletekből is meg lehet vásárolni.,

  A reakció eljárás a DNS microarray játszódik több lépésben:

  1. Gyűjtemény minták – egy minta, ebben az esetben meghatározni, mint a sejt/szövet, a szervezet, hogy szeretnénk folytatni a tanulmány. Kétféle mintát gyűjtünk: egészséges sejteket és fertőzött sejteket, összehasonlításképpen és az eredmények elérése érdekében.
  2. az mRNS – RNS izolálását egy oszlop vagy oldószer, például fenol-kloroform segítségével extraháljuk a mintából. Az extrahált RNS-ből az mRNS elkülönül, így az rRNA és a tRNA mögött marad., Mivel az mRNS-nek poli-a farka van, a poli-t-farokkal ellátott oszlopgyöngyöket használják az mRNS megkötésére. Az extrakció után az oszlopot pufferrel öblítjük, hogy az mRNS-t elkülönítsük a gyöngyökből. A puffer megzavarja az mRNS és a gyöngyök közötti hibrid kötéseket a pH zavarásával.
  3. címkézett cDNA létrehozása-cDNA (komplementer DNS szál) létrehozásához az mRNS fordított átírása történik. Mindkét mintát ezután különböző fluoreszkáló festékekkel építik be fluoreszkáló cDNA szálak előállítására. Ez segít megkülönböztetni a cdnas mintakategóriáját.,
  4. hibridizáció-a jelölt cDNAs mindkét minta kerülnek a DNS mikroarray úgy, hogy minden cDNA kap hibridizálódik a kiegészítő szál; ők is alaposan mossuk, hogy távolítsa el a határtalan szekvenciák.
  • Collection and analysis

  az adatgyűjtés mikroarray szkennerrel történik. Ez a szkenner lézerből, számítógépből és kamerából áll. A lézer gerjeszti a cDNA fluoreszcenciáját, jeleket generál.

  amikor a lézer beolvassa a tömböt, a kamera rögzíti az előállított képeket., Ezután a számítógép tárolja az adatokat, majd azonnal megadja az eredményeket. Az így előállított adatokat ezután elemezzük. A színek intenzitásának különbsége minden helyszínen meghatározza a gén karakterét az adott helyszínen.,drága

  4. A tömbök biztosít közvetett intézkedés a relatív koncentráció
  5. , Különösen bonyolult emlős genom szekvenciát jelent, gyakran nehéz design tömbök, amelyben több kapcsolódó DNS/RNS szekvenciák nem kötelező, hogy ugyanazt a szonda a tömb
  6. A DNS-tömb csak észlelni szekvenciák, hogy a tömb célja az volt, hogy érzékeli

További információk

• Minden DNS Szekvenálás Tartalom
• DNS Szekvenálás
• DNS-Szekvencia Közgyűlés
• Nagy áteresztőképességű DNS Szekvenálás Technikák
• Shotgun Szekvenálási