ADN microarray

• Revizuită de Dr. Tomislav Meštrović, MD, Ph. d.

  microarray este o recent dezvoltat tehnologia utilizată în cercetare a cancerului și în tratamentul farmacologic al altor boli, cum ar fi leziuni orale. În această tehnologie, un diapozitiv microscop (în mod normal, o matrice 2D din sticlă, chips-uri de siliciu, sau membrana de nailon) imprimate cu mii de pete minute în poziții definite este utilizat.©DAndre Nante/ .,microarray ADN (cip genetic, cip ADN sau biochip) este o astfel de tehnologie care măsoară ADN-ul sau folosește ADN-ul ca parte a sistemului său de detectare. În fiecare dintre petele din această matrice, o secvență ADN cunoscută sau o genă este aranjată ordonat.în total, probele tuturor genomurilor unui organism pot fi prezente într-o singură lamelă. O bază de date computerizată este apoi utilizată pentru a înregistra locația și secvența fiecărui loc. Aceste secvențe de ADN sunt comparate între ele pentru a obține informațiile necesare., Aceasta tehnica permite cercetătorilor să investigheze și să analizeze expresia de mii de gene într-o singură reacție și să abordeze probleme care sunt considerate a fi nontraceable.

  principiu și tehnică

  principiul de bază din spatele microarray-ului ADN este „hibridizarea acidului nucleic”. În acest proces, două fire complementare ale unui ADN sunt unite prin legături de hidrogen pentru a forma o moleculă dublu catenară. Acest lucru ajută cercetătorii să compare și să analizeze moleculele ADN sau ARN ale secvențelor identice.,

  tehnica constă din trei secțiuni majore:

  1. prepararea unui cip ADN
  2. experimentul
  3. colectarea și analiza rezultatelor
  • prepararea cipului ADN și experimentul

  Mai multe metode sunt utilizate pentru prepararea unui tablou reperat. În unele cazuri, sondele deja proiectate care sunt atașate la ace fine sunt imprimate pe o suprafață de matrice chimică folosind un robot (ingineria suprafeței). Chimia și mascarea fotoactivată sunt de asemenea folosite pentru a face sonde, iar acestea pot fi cumpărate și din magazine.,procedura de reacție a microarray-ului ADN are loc în mai multe etape:

  1. colectarea probelor – o probă poate fi, în acest caz, definită ca celula/țesutul organismului pe care dorim să efectuăm studiul. Sunt colectate două tipuri de probe: celule sănătoase și celule infectate, pentru comparație și pentru a obține rezultatele.
  2. izolarea ARNm este extrasă din probă utilizând o coloană sau un solvent ca fenol-cloroform. Din ARN extras, ARNm este separat lăsând în urmă rRNA și Tarn., Deoarece mRNA are o coadă Poli – a, Margele de coloană cu cozi poli-T sunt folosite pentru a lega ARNm. După extracție, coloana este clătită cu tampon pentru a izola ARNm de margele. Tamponul perturbă legăturile hibride dintre ARNm și margele prin perturbarea pH – ului.
  3. crearea ADNc etichetate-pentru a crea ADNc (strand ADN complementar), se face transcrierea inversă a ARNm. Ambele probe sunt apoi încorporate cu diferite coloranți fluorescenți pentru producerea de fire fluorescente de ADNc. Acest lucru ajută la distingerea categoriei de eșantioane a cDNAs.,
  4. Hibridizare – etichetate cDNAs din ambele eșantioane sunt plasate în ADN microarray, astfel încât fiecare adnc se hibridizat sale complementare fir; ele sunt, de asemenea, bine spălate pentru a elimina nelimitat de secvențe.
  • colectare și analiză

  colectarea datelor se face folosind un scaner microarray. Acest scaner constă dintr-un laser, un computer și o cameră foto. Laserul excită fluorescența ADNc, generând semnale.când laserul scanează matricea, camera înregistrează imaginile produse., Apoi computerul stochează datele și furnizează rezultatele imediat. Datele astfel produse sunt apoi analizate. Diferența de intensitate a culorilor pentru fiecare punct determină caracterul genei în acel loc.,scump

• tablouri oferi o masura indirecta de concentrare relativă
• în Special pentru complexul de mamifere genomuri, este adesea dificil de a proiecta tablouri în care mai multe legate de ADN/ARN secvențe nu se leagă la aceeași sondă pe matrice
• UN ADN matrice poate detecta doar secvențe care matrice a fost conceput pentru a detecta

bibliografie

• Toate Secvențiere a ADN-ului de Conținut
• Secvențiere a ADN-ului
• Secvență de ADN-ul de Asamblare
• High-throughput Tehnicilor de Secvențiere ADN,
• Pusca de Secvențiere