Tehnici de extracție și de izolare din produse naturale: o revizuire cuprinzătoare

componentele extras din metodele de mai sus sunt complexe și conțin o varietate de produse naturale care necesită măsuri suplimentare de separare și purificare pentru a obține activă fracțiune sau pur naturale produse. Separarea depinde de diferența fizică sau chimică a produsului natural individual., Cromatografia, în special cromatografia pe coloană, este principala metodă utilizată pentru a obține produse naturale pure dintr-un amestec complex.

separarea bazată pe proprietățile de adsorbție

cromatografia coloanei de adsorbție este utilizată pe scară largă pentru separarea produselor naturale, în special în stadiul inițial de separare, datorită simplității sale, capacității mari și costului scăzut al adsorbanților, cum ar fi silicagelul și rășinile macroporoase. Separarea se bazează pe diferențele dintre afinitățile de adsorbție ale produselor naturale pentru suprafața adsorbanților., Selectarea adsorbanților (faza staționară), precum și faza mobilă este crucială pentru a realiza o bună separare a produselor naturale, pentru a maximiza recuperarea compușilor țintă și pentru a evita adsorbția ireversibilă a compușilor țintă pe adsorbanți.

silicagelul este cel mai utilizat adsorbant în investigarea fitochimică. S-a estimat că aproape 90% din separarea fitochimică (scala preparativă) s-a bazat pe silicagel. Silicagelul este un absorbant polar cu grupuri de silanol. Moleculele sunt reținute de silicagel prin legături de hidrogen și interacțiuni dipol–dipol., Astfel, produsele naturale polare sunt reținute mai mult în coloanele de silicagel decât cele nepolare. Uneori, anumite produse naturale polare pot suferi chemisorbție ireversibilă. Dezactivarea silicagelului prin adăugarea de apă înainte de utilizare sau prin utilizarea unei faze mobile care conține apă va slăbi adsorbția. Decantarea severă poate apărea atunci când se separă alcaloizii pe silicagel, iar adăugarea unei cantități mici de amoniac sau amine organice, cum ar fi trietilamina, poate reduce decantarea., Doisprezece alcaloizi aparținând grupului de chanofruticozinat de metil, incluzând șase alcaloizi noi, prunifoline A-F (68-73, Fig. 11), au fost obținute din frunze de Kopsia arborea inițială de silicagel pentru cromatografie pe coloană, folosind gradient MeOH–CHCl3 ca fază mobilă urmată de centrifugare TLC folosind amoniac saturate Et2O–hexan sau EtOAc/hexan sisteme ca eluent .

Alumină (oxid de aluminiu) este un puternic polar adsorbant utilizat în separarea de produse naturale, mai ales în separarea de alcaloizi. Câmpul puternic pozitiv al Al3+ și siturile de bază din alumină care afectează compușii ușor polarizați conduc la adsorbția pe alumină care este diferită de cea pe silicagel., Aplicarea aluminei în separarea produselor naturale a scăzut semnificativ în ultimii ani, deoarece poate cataliza deshidratarea, descompunerea sau izomerizarea în timpul separării. Zhang și Su au raportat un protocol cromatografic folosind alumină de bază pentru a separa taxolul (74, Fig. 11) din extractul de culturi Taxus cuspidate calus și a constatat recuperarea taxol a fost mai mult de 160%. Ei au descoperit că creșterea taxolului a provenit din izomerizarea 7-epi-taxolului (75) catalizat de alumină., De asemenea, sa constatat că o cantitate mică de taxol ar putea fi descompusă la baccatin III (76) și 10-deacetilbaccatin III (77) în coloana de alumină . Investigațiile ulterioare privind separarea taxolului pe alumina acidă, neutră și bazică au indicat faptul că Lewis souci și miezurile de activitate de bază de pe suprafața aluminei au indus izomerizarea 7-epi-taxolului la taxol .structurile poliamidelor utilizate în cromatografie conțin atât grupări acrilice, cât și amidice., Interacțiunea hidrofobă și/sau a legăturii de hidrogen va avea loc în cromatografia coloanei de poliamidă în funcție de compoziția fazei mobile. Când solvenții polari, cum ar fi solvenții apoși, sunt utilizați ca fază mobilă, poliamidele acționează ca fază staționară nepolară, iar comportamentul cromatografiei este similar cu cromatografia în fază inversată. În contrast, poliamidele acționează ca fază staționară polară, iar comportamentul cromatografiei este similar cu cromatografia de fază normală., Cromatografia coloanei de poliamidă este un instrument convențional pentru separarea polifenolilor naturali, inclusiv antrachinone, acizi fenolici și flavonoide, ale căror mecanisme sunt atribuite formării legăturilor de hidrogen între absorbanții de poliamidă, faza mobilă și compușii țintă. Gao și colab. a studiat comportamentul cromatografic al polifenolilor, inclusiv acizii fenolici și flavonoidele pe coloana de poliamidă. Sa constatat că poliamida a funcționat ca acceptor de legături de hidrogen, iar numărul de hidroxili fenolici și pozițiile lor în moleculă au afectat puterea adsorbției ., În plus față de polifenoli, a fost raportată și separarea altor tipuri de produse naturale prin cromatografia coloanei de poliamidă. Saponinele totale ale Kuqingcha pot fi îmbogățite prin cromatografia coloanei de poliamidă, care a redus semnificativ presiunea sistolică a șobolanului SHR . Folosind un amestec de diclormetan și metanol într-un gradient ca eluent, cele șapte majore izochinolină alcaloizi în Coptidis Rhizoma inclusiv berberina (39), coptizină (40), palmatine (41), jatrorrhizine (42), columbamine (78), groenlandicine (79) (Fig. 4) și magnoflorină (80, Fig., 11) au fost separate printr-o cromatografie cu coloană de poliamidă într-o singură etapă .rășinile macroporoase adsorbante sunt adsorbanți polimerici cu structuri macroporoase, dar fără grupuri de schimb ionic care pot adsorbi selectiv aproape orice tip de produse naturale. Acestea au fost utilizate pe scară largă fie ca sistem autonom, fie ca parte a unui proces de pretratare pentru îndepărtarea impurităților sau îmbogățirea compușilor țintă datorită avantajelor lor, care includ o capacitate mare de adsorbție, un cost relativ scăzut, o regenerare ușoară și o extindere ușoară., Mecanismele adsorbante ale rășinilor macroporoase adsorbante includ forțele electrostatice, legarea hidrogenului, formarea complexă și acțiunile de cernere a mărimii între rășini și produsele naturale în soluție. Suprafața, diametrul porilor și polaritatea sunt factorii cheie care afectează capacitatea rășinilor . 20(S)-protopanaxatriol saponine (PTS) (81) și 20(S)-protopanaxadiol saponine (PDS), (82, Fig. 11) sunt cunoscute ca două componente bioactive majore în rădăcina Panax notoginseng., PTS și PDS au fost separate cu succes cu soluții apoase de etanol 30 și 80% (v/v) din coloana de rășină macroporoasă D101, respectiv. Comportamentele cromatografice ale PDS și PTS au fost apropiate de cromatografia de fază inversă atunci când au comparat profilurile cromatografice ale cromatografiei coloanelor de rășină macroporoasă cu cromatograma HPLC pe o coloană Zorbax SB-C18 . Recent, Meng și colab. a obținut total saponine de Panacis Japonici Rhizoma (PJRS) folosind D101 macroporoasă rășină., Conținutul celor patru saponine majore, chikusetsusaponinele V (55), IV (56) și IVa (57) și pseudoginsenozida RT1 (58) (Fig. 8), în PJRS obținute a fost mai mult de 73%. PJRS a servit ca referință standard pentru controlul calității Panacis Japonici Rhizoma . Unii cercetători au presupus că mecanismul principal de adsorbție dintre rășinile macroporoase și polifenoli a fost asociat cu formarea de legături de hidrogen între atomul de oxigen al legăturii eterice a rășinii și atomul de hidrogen al grupării fenolice hidroxil a fenolului., Forța de interacțiune a legăturii de hidrogen a fost afectată semnificativ de valoarea pH-ului soluției .azotatul de argint este un alt suport solid util în separarea produselor naturale. Aceste produse naturale care conțin electronii π interacționează reversibil cu ionii de argint pentru a forma complexe polare. Cu cât este mai mare numărul de legături duble sau aromaticitatea produsului natural, cu atât mai puternice sunt formele de complexare. Azotatul de argint este de obicei impregnat pe silicagel (SNIS) sau alumină pentru separare. Mai multe grupuri de cercetare au raportat separarea acizilor grași pe SNIS . Wang și colab., a raportat izolarea zingiberene din oleoresin ghimbir prin cromatografie coloană SNIS . O pereche de izomeri, acid brasiliensic (83, Fig. 11) și isobrasiliensic acid (84), au fost separate de Calophyllum brasiliense de Lemos et al. pe o coloană SNIS . Unele grupuri de cercetare au aplicat, de asemenea, nitrat de argint în sistemul cu două faze în cromatografia contracurentă de mare viteză (HSCCC) pentru a îmbunătăți separarea. Xanthochymol (85) și guttiferone E (86) sunt o pereche de π bond benzofenonă izomeri de Garcinia xanthochymus de AgNO3-HSCCC., Ordinea de eluție a π bond izomeri în acest AgNO3-HSCCC separare este internă π bond (mai devreme) < terminal, care este identic cu cel observat la SNIS cromatografie pe coloană .

separarea bazată pe coeficientul de partiție

cromatografia de partiție (PC) urmează principiul extracției lichid–lichid bazat pe solubilitatea relativă în două lichide nemiscibile diferite. În stadiul incipient, o fază lichidă a fost acoperită cu o matrice solidă (silicagel, carbon, celuloză etc.) ca fază staționară și o altă fază lichidă a fost utilizată ca fază mobilă., Dezavantajul unei faze staționare ușor de îndepărtat și a rezultatelor irepetabile a dus la faptul că acest tip de PC este rar folosit astăzi. Faza legată, în care faza staționară lichidă este legată chimic de suportul inert, care este utilizat ca fază staționară depășește aceste dezavantaje. Alchil disponibile în comerț, cum ar fi C8 și C18, aril, Ciano și silani substituiți amino sunt adesea folosite ca faze lipite, care sunt utilizate pe scară largă pentru a separa o varietate de produse naturale, în special în etapa finală de purificare.

trei puncte (notoginsenoside R1 (87) (Fig., 11), ginsenoside Rg1 (55) (Fig. 8) și Re (88) (Fig. 11)) și două PDS (Fig. 3) au fost bine separate într–o coloană C18 folosind sistemul EtOH-H2O ca fază mobilă . O nouă fază staționară de silice pe bază de poliacrilamidă a fost sintetizată de Cai și colab. și a fost aplicată cu succes în separarea galactooligozaharide și saponine din Paris polyphylla cu EtOH–H2O ca fază mobilă .

cromatografia contra-curent (CCC) este un fel de PC care deține faza staționară lichidă prin gravitație sau forță centrifugă., CCC a fost rar utilizat în stadii incipiente datorită retenției sale staționare slabe, timpului lung de separare și procesului intensiv de muncă. CCC a fost îmbunătățit semnificativ în anii 1980, cu toate acestea, când au fost dezvoltate CCC moderne, inclusiv hsccc și cromatografia de partiție centrifugă (CPC). Sistemele hidrodinamice CCC, cum ar fi HSCCC, au o mișcare de rotație planetară în jurul a două axe rotative fără garnituri rotative, ceea ce oferă un proces de cădere de presiune scăzută. CCC hidrostatic, de exemplu.,, cromatografia de partiție centrifugă, utilizează o singură axă rotativă și are o serie de camere de interconectare pentru a prinde faza staționară, ceea ce oferă o retenție mai mare a fazei staționare și o presiune mai mare a sistemului decât cea a HSCCC. Presiunea ridicată a sistemului în CPC împiedică îmbunătățirea rezoluției prin creșterea lungimii coloanei. CCC de înaltă performanță (HPCCC) reprezintă o nouă generație de CCC hidrodinamic și funcționează în același mod ca și HSCCC, dar cu un nivel g mult mai ridicat., La HPCCC instrumente pentru a genera mai mult de 240 g, în timp ce mai devreme HSCCC echipamente dat g-nivelurile de mai puțin de 80 g. HPCCC scurtează timpul de separare la mai puțin de o oră față de mai multe ore, în anii HSCCC și se poate realiza de cel puțin zece ori tranzitată de un HSCCC instrument ., În comparație cu convenționale coloana de separare metoda folosind o fază staționară solidă, atât hidrostatică și hidrodinamică CCC sisteme oferă unele avantaje, inclusiv eliminarea adsorbția ireversibilă și de vârf de decantare, capacitate de încărcare mare, mare eșantion de recuperare, risc minim de probă de denaturare și consumul scăzut de solvenți. Limitarea CCC este că separă compușii numai într-o fereastră de polaritate relativ îngustă. În ultimii 20 de ani, HSCCC, HPCCC și CPC atras o mare atenție în separarea științei și au fost utilizate pe scară largă în separarea de produse naturale., Tang și colab. dezvoltat o HSCCC metodă care utilizează o faza a doua solvent sistem care conține acetat de etil–n-butanol–etanol–apă (4:2:1.5:8.5, v/v/v/v) pentru a separa șase flavone C-glicozide (89-94, Fig. 12), inclusiv doi compuși noi din Lophatherum gracile . HSCCC, HPCCC și CPC au fost, de asemenea, aplicate cu succes în separarea uleiului volatil, care este dificil de separat prin cromatografia convențională a coloanelor., Șase compuși volatili (curdione (95), curcumol (96), germacrone (97), curzerene (98), 1,8-cineol (99) și β-elemene (100)) au fost izolate de către CPC de ulei esential de Curcuma wenyujin folosind un neapoase două faze solvent sistem format din eter de petrol–acetonitril–acetonă (4:3:1 v/v/v) ., Patru mari sesquiterpenoide (ar-turmerone (101), α-turmerone (102), β-turmerone (103), și adresa de E-atlantone (104)) cu structuri similare au fost separate de ulei esential de Curcuma longa într-un singur HSCCC rula folosind-o în două faze solvent sistem compus din n-heptan–acetat de etil–acetonitril–apă (9.5/0.5/9/1, v/v) și fiecare compus obținut peste 98% puritate . Linalool (105), terpinen-4-ol (106), α-terpineol (107), p-anisaldehyde (108), anetol (109) și foeniculin (110) s-au izolat cu succes de uleiul esențial de Pimpinella anisum de HPCCC folosind treptat gradient de eluție ., Li și colab. a dezvoltat o metodă CPC pentru separarea alcoolului de patchouli (111) cu un sistem de solvent eteric–acetonitril (1:1, v/v). Mai mult de 2 g de alcool patchouli cu o puritate de peste 98% au fost izolate din 12, 5 g de ulei esențial pe o coloană de 240 ml . Coloana de volum mare (câțiva litri) a fost adoptată în echipamentele comerciale hidrostatice CCC și hidrodinamice CCC pentru separarea la scară pilot/industrială. Puține rapoarte ar putea fi obținute din cauza confidențialității comerciale. Este dificil să se judece dacă CCC hidrostatic sau hidrodinamic este mai bun pentru aplicații industriale., Utilizatorii pot selecta diferite tipuri de instrumente CCC în scopuri diferite. Când faza staționară este slab reținute în hidrodinamice CCC din cauza viscozitate mare și densitate mică diferențe între mobile și faze staționare, hidrostatice CCC este mai practic decât hidrodinamice CCC pentru reținerea fazei staționare de hidrostatice CCC este mai puțin sensibilă la proprietățile fizice ale sistemelor lichide și va avea o mai mare reținere de faza staționară., Atunci când faza staționară este bine reținută în CCC hidrodinamic, o eficiență mai mare de separare va fi obținută din CCC hidrodinamic decât din CCC hidrostatic cu același sistem lichid și volume de coloane similare, deoarece CCC hidrostatic are o eficiență relativ scăzută de partiție datorită unui grad limitat de amestecare, iar sistemul hidrodinamic asigură o amestecare eficientă pentru a obține o eficiență

de Separare bazate pe dimensiunea moleculară

separarea de produse naturale prin filtrare prin membrană (MF) sau de gel filtrare, cromatografie (GFC) este pe baza lor moleculară dimensiuni.

filtrarea membranei (MF)

în MF, membrana semipermeabilă permite moleculelor mai mici să treacă și să rețină moleculele mai mari., MF de produse naturale ar putea fi caracterizate ca microfiltrare, ultrafiltrare și nanofiltrare pe baza dimensiunii porilor membranei aplicate.filtrarea cu membrană a fost un instrument puternic pentru concentrarea, clarificarea și îndepărtarea impurităților în laborator, precum și în industria alimentară și Farmaceutică. Conținutul de fenoli total (338%), acid clorogenic (66) (Fig. 10) (483%), teobromină (112, Fig., 13) (323%), cafeina (113) (251%), taninurile condensate (278%) și saponinele (211%) din extractul apos de Ilex paraguariensis au fost semnificativ crescute prin nanofiltrare . Filtrarea membranei de cuplare se aplică atunci când o singură etapă de filtrare a membranei nu este satisfăcătoare. O secvență de microfiltrare, ultrafiltrare și nanofiltrare a fost aplicată în izolarea componentelor bioactive din extractul de frunze de măsline. Microfiltrarea urmată de ultrafiltrare a îndepărtat impuritățile mai mari de 5 kDa., Nanofiltrarea a recuperat polifenolii și flavonoidele antioxidante și antibacteriene, iar conținutul componentei majore, oleuropeina (114), în retentatul de nanofiltrare a fost concentrat de aproximativ zece ori .

Gel filtrare, cromatografie (GFC)

Gel filtrare, cromatografie este, de asemenea, cunoscut sub numele de cromatografie pe gel permeabil sau dimensiunea cromatografia de excludere., Moleculele mici au un timp de retenție mai lung în GFC decât moleculele mari.Sephadex este format prin reticulare dextran, și G-tipuri de Sephadex au fost utilizate pentru separarea compușilor hidrofili , cum ar fi peptide, oligozaharide și polizaharide .Sephadex LH20, un derivat hidroxipropilat al Sephadex G25, are atât naturi hidrofobe, cât și hidrofile. Un mecanism de adsorbție a fost, de asemenea, implicat în separare folosind Sephadex LH-20. Sephadex LH-20 poate fi utilizat pentru separarea de o mare varietate de produse naturale, fie într-un sistem de solvent apos sau neapos., Oligozaharidele arabinoxilan feruloilate ale grâului intermediar de cereale perene au fost bine separate prin Sephadex LH-20 folosind 100% apă ca fază mobilă . Trei noi diterpene de pirimidină, axistatine 1-3 (115-117, Fig. 14), împreună cu trei cunoscute formamides (118-120) au fost izolate de la anti-cancer activ CH2Cl2 fracțiune de Agelas axifera peste Sephadex LH-20 de coloane cu o serie de sisteme de solvenți , urmată de purificare prin Prep-HPLC .

Poliacrilamidă (bio-gel P) și cross-linked de agaroză au fost, de asemenea, utilizat în separarea de produse naturale.

separarea bazată pe rezistența Ionică

cromatografia cu schimb de ioni (IEC) separă moleculele pe baza diferențelor de încărcare a suprafeței lor nete. Unele produse naturale, cum ar fi alcaloizi și acizi organici care posedă un grup funcțional capabil de ionizare, ar putea fi separate prin IEC., Moleculele încărcate ar putea fi prinse și eliberate de rășina schimbătoare de ioni prin schimbarea rezistenței ionice a fazei mobile (de exemplu, schimbarea pH-ului sau a concentrației de sare). Rășinile schimbătoare de ioni cationi au fost utilizate pentru separarea alcaloizilor, în timp ce rășinile schimbătoare de ioni anioni au fost utilizate pentru separarea acizilor organici naturali și fenolilor.

încărcat pozitiv antociani au fost separate de neutru compuși polifenolici în XAD-7 tratate Actinidia melanandra fructe (kiwi) extras folosind rășina Dowex 50WX8 cationi de schimb ionic rășină ., Feng și Zhao au folosit cromatografia semi −preparativă pentru a separa (-) epigallocatechin −galat și (-) epicatechin-galat (122) în extractul brut de ceai cu gel slab acid CM-Sephadex C-25 pe bază de polizaharide . Un nou alcaloid, fumonisin B6 (123), împreună cu un alcaloid cunoscut, fumonisin B2 (124), a fost izolat prin IEC peste straturile X-C rășină schimbătoare de cationi Rp, urmată de cromatografie în fază inversă din extractul de culturi Aspergillus niger nrrl 326 .

Alte moderne tehnici de separare

distilare Moleculară (MD)

prin distilare Moleculară separă prin distilare moleculară, sub vid, la o temperatură cu mult sub punctul său de fierbere. Este o metodă de distilare adecvată pentru separarea compușilor termosensibili și cu greutate moleculară mare. Borgarello și colab. a obținut un timol (125, Fig., 16) fracție de îmbogățire din ulei esențial de oregano prin distilare moleculară modelată de rețele neuronale artificiale. Fracția obținută avea proprietăți antioxidante și putea stabiliza uleiul de floarea soarelui . Trei tipuri de ftalați au fost eliminați efectiv din uleiul de portocale dulci prin distilare moleculară în condiții optime (temperatura de evaporare de 50 °C, presiunea evaporatorului de 5 kPa și un debit de alimentare de 0,75 ml/min) .

Preparativă cromatografia de gaze (Prep-GC)

cromatografia de Gaze (GC) cu înaltă eficiență de separare și rapid de separare și analiză face potențial ideal de incredere metoda de separare a compușilor volatili. Portul de injecție, coloana, dispozitivul de divizare și dispozitivul de capcană al echipamentului GC trebuie modificate pentru separarea preparativă din cauza lipsei de Prep-GC comercial .cinci compuși volatili, și anume, curzerene (98) (6.,6 mg), β-elemene (100, Fig. 12) (5.1 mg), curzerenone (126) (41.6 mg), curcumenol (127) (46.2 mg), și curcumenone (128) (21.2 mg) (Fig. 17), au fost separate de extractul de metanol din rizomul Curcuma prin Prep-GC pe o coloană din oțel inoxidabil ambalată cu 10% OV-101 (3 m × 6 mm, i.d.) după 83 de injecții unice (20 µl). Prep-GC a fost, de asemenea, aplicat pentru separarea izomerilor naturali. Un total de 178 mg de csi-asaronă (129) și 82 mg de trans-asaronă (130) s-au obținut din ulei esențial de Acorus tatarinowii după 90 de injecții unice (5 µl) de pe aceeași coloană ca mai sus ., Prep-GC a devenit o metodă importantă de separare pentru compușii volatili naturali; cu toate acestea, o sarcină de probă mai grea și coloana preparativă cu diametru mare folosită au scăzut eficiența . Între timp, dezavantajele Prep-GC, inclusiv lipsa echipamentelor comerciale Prep-GC, consumul unui volum mare de gaz purtător, descompunerea compușilor termolabili la temperaturi ridicate de funcționare, dificultățile de colectare a fracțiunilor și producția scăzută, restricționează în continuare utilizarea Prep-GC.

fluid Supercritic cromatografie (SFC)

SFC folosește fluid supercritic ca fază mobilă. SFC integrează avantajele atât GC, cât și cromatografia lichidă (LC), deoarece fluidele supercritice posedă proprietăți De capacitate ridicată de dizolvare, difuzivitate ridicată și vâscozitate scăzută, ceea ce permite separarea rapidă și eficientă., Astfel, SFC poate utiliza o coloană mai lungă și particule mai mici ale fazei staționare decât HPLC, care oferă un număr mai mare de plăci teoretice și o mai bună separare. SFC poate fi utilizat pentru separarea compușilor nevolatili sau labili termic la care GC nu este aplicabil. Sistemele SFC sunt compatibile cu o gamă largă de detectoare diferite, inclusiv cele utilizate în sistemele LC și GC., Polaritatea fazei mobile utilizate pe scară largă, S-CO2, în SFC este aproape de polaritatea hexanului, astfel încât SFC a fost utilizat pentru separarea produselor naturale nepolare, cum ar fi acizii grași, terpenele și uleiurile esențiale timp de mulți ani. Modificatorii eluenți, cum ar fi metanolul și acetonitrilul, sporesc rezistența la eluție, ceea ce crește interesul pentru separarea produselor naturale polare de SFC .Zhao și colab. s-au separat cu succes trei perechi de saponine spirostanol diastereomerice 25 R/S (131-136, Fig., 18) din materialul seminal TCM Trigonellae (sămânța Trigonella foenum-graecum) pe două coloane CHIRALPAK IC cuplate în tandem . Yang și colab. aplicat SFC pentru preparare de separare a două perechi de 7-epimeric spiro oxindole alcaloizi (137-140) de tulpini cu cârlige de Uncaria macrophylla (din plante sursă pentru TCM Uncariae Ramulus Cum Uncis) pe o Viridis Prep Siliciu 2-EP OBD coloana folosind acetonitril conțin 0.2% DEA modificat S-CO2. Faza mobilă neapoasă utilizată în SFC a împiedicat tautomerizarea alcaloizilor spiro oxindol separați ., SFC se aplică și în separarea enantiomerilor naturali. (R,S)-goitrin (141-142) este ingredientul activ al TCM Isatidis Radix. Separarea chirală a goitrinelor (R) și (s) a fost realizată cu succes de prep-SFC pe o coloană Chiralpak IC folosind acetonitrilul ca modificator organic .

Moleculară imprimat tehnologie

Moleculară imprimat tehnologie a fost atractivă metodă de separare în ultimul deceniu, din cauza caracteristicilor sale unice, care includ selectivitate înaltă, low-cost și ușor de preparat. Multe cavități complementare cu memoria dimensiunii, formei și grupurilor funcționale ale moleculelor de șablon sunt generate atunci când moleculele de șablon sunt îndepărtate din polimerul imprimat molecular (MIP)., Astfel, molecula șablon și analogii săi vor avea recunoașterea specifică și adsorbția selectivă pentru PMI. MIPs au fost utilizate pe scară largă în separarea produselor naturale sau ca sorbenți de extracție în fază solidă pentru prepararea probelor de materiale pe bază de plante pentru a îmbogăți compușii minori.

Ji și colab. dezvoltat multi-șablon polimeri imprentati molecular folosind DL-tirozină și phenylpyruvic acid ca șablon pentru a separa moleculele dencichine (143, Fig. 19) din extractul de apă din Panax notoginseng., Ambele dencichine și modelul moleculei de DL-tirozină (144) conține un amino (NH2) de grup și un acid carboxilic (COOH) de grup, și alte șablon moleculă, phenylpyruvic acid (145), are un α-ceto acid (COCOOH) de grup, care poate fi, de asemenea, găsite în structura dencichine . Ma și colab. a dezvoltat o metodă de separare preparativă pentru a separa solanesolul (146) de frunzele de tutun prin cromatografie flash bazată pe PMI., MIP a fost preparat cu metacrilat de metil ca monomer, solanesol ca moleculă șablon și Dimetacrilat de etilenglicol ca reticulator printr-o metodă de polimerizare în suspensie. Un total de 370.8 mg de solanesol cu 98.4% puritate a fost separat de extract de frunze de tutun cu un randament de 2,5% din greutatea uscată a frunzelor de tutun . Tu și colab. folosit termo-sensibil magnetic PDM pentru a separa cele trei mari curcuminoids, curcumina (147), demethoxycurcumin (148), și bisdemethoxycurcumin (149), de la TCM Curcumae Longae Rhizoma (rizomi de Curcuma longa)., MIP magnetic termo-receptiv proiectat a arătat un factor de imprimare bun pentru curcuminoide într-un interval cuprins între 2.4 și 3.1, termo-receptivitate și separare magnetică rapidă (5 s) .

Simulat mutarea pat cromatografie

Simulat pat în mișcare (SMB) cromatografie utilizează mai multe coloane cu fază staționară (pat)., În contracurent mișcarea de pat este simulat printr-valve rotative, care se schimba periodic intrare (alimentare și eluent) și de evacuare (extract și rafinat). Procesul SMB este o metodă de separare continuă și un instrument puternic pentru separarea pe scară largă a produselor naturale, cu avantajul unui consum mai mic de solvenți pe o perioadă mai scurtă de timp.două ciclopeptide, ciclolinopeptide C și E (150-151, Fig., 20), au fost obținute din ulei de semințe de in folosind un SMBC cu trei zone cu opt coloane de silicagel sferice de fază normală HPLC preparative și folosind etanol absolut ca desorbant . Kang și colab. a dezvoltat un proces SMB tandem format din două unități SMB cu patru zone într-o serie cu aceleași dimensiuni ale particulelor adsorbante în inelul I și inelul II pentru a separa paclitaxelul (taxol, 74) (Fig. 11), 13-dehidroxibaccatină III (152) și 10-deacetilpaclitaxel (153). Paclitaxelul a fost recuperat în prima unitate SMB, în timp ce 13-dehidroxibaccatina III și 10-deacetilpaclitaxelul au fost separate în a doua unitate SMB ., Mun a îmbunătățit această metodă de cromatografie SMB prin utilizarea adsorbantului de dimensiuni diferite ale particulelor în inelul I și inelul II . Fluidele supercritice pot fi de asemenea utilizate ca desorbant în cromatografia SMB. Liang și colab. aplicat cu succes dioxid de carbon supercritic cu etanol ca desorbant pentru un SMB cu trei zone pentru a separa resveratrolul (60) (Fig. 9) și emodin (44) (Fig. 4) dintr-un extract brut de TCM Polygoni Cuspidati Rhizoma et Radix .

Multi-dimensional cromatografice de separare

componentelor din extractul supus la separare au fost complexe, și, în general, nici un compus pur va fi separat într-o coloană cromatografică. Separarea multidimensională bazată pe extracția în fază solidă și cuplarea mai multor coloane cu diferite faze staționare îmbunătățește considerabil eficiența de separare., Cu mai multe echipamente comerciale de separare dimensionale multiple care intră pe piață, separarea produselor naturale devine din ce în ce mai rapidă, eficientă și automatizată.