-
Tarkasteli Tohtori Tomislav Meštrović, MD, Ph. D.
microarray on äskettäin kehitetty tekniikka, jota käytetään syövän tutkimus ja farmakologinen hoito muita sairauksia, kuten suun haavaumia. Tässä tekniikka, mikroskoopin objektilasille (normaalisti 2D array valmistettu lasi -, pii-sirut, tai nylon kalvo) painettu tuhansia minuutti paikkoja varmaa kannat on käytetty.
©DAndre Nante/.,com
DNA microarray (geeni siru, DNA-siru, tai biochip) on yksi tällainen tekniikka, että toimenpiteet joko DNA: ta tai käyttää DNA: n osana sen havaitseminen järjestelmä. Jokaisessa tämän ryhmän pisteessä on järjestetty tunnettu DNA-sekvenssi tai geeni.
kaiken kaikkiaan eliön kaikkien genomien näytteet voivat olla yhdellä liukumäellä. Tämän jälkeen käytetään tietokonetietokantaa, joka tallentaa kunkin paikan sijainnin ja järjestysnumeron. Näitä DNA-sekvenssejä verrataan toisiinsa tarvittavan tiedon saamiseksi., Tämän tekniikan avulla tutkijat voivat tutkia ja analysoida ilmaus tuhansia geenejä yhdessä reaktio ja käsitellä kysymyksiä, jotka ovat uskotaan olevan nontraceable.
Periaate ja Tekniikka
perusperiaatteena DNA microarray on ”nukleiinihapon hybridisaatio”. Tässä prosessissa kaksi DNA: n toisiaan täydentävää juostetta yhdistyvät vetysidoksilla muodostaen kaksijuosteisen molekyylin. Tämä auttaa tutkijoita vertailemaan ja analysoimaan identtisten sekvenssien DNA-tai RNA-molekyylejä.,
tekniikka koostuu kolme päävaihetta:
- Valmistelu DNA-siru
- kokeilu
- Kokoelma ja tulosten analysointi
- Valmistelu DNA-siru ja kokeilu
Useita menetelmiä käytetään valmistella huomasi array. Joissakin tapauksissa jo suunnitellut luotaimet, jotka on kiinnitetty hienoihin neuloihin, tulostetaan kemialliselle matriisipinnalle robotin avulla (pintatekniikka). Valoaktivoidut kemia ja rajauksella käytetään myös tehdä anturit, ja näitä voi ostaa myös kaupoista.,
reaktio menettely DNA microarray tapahtuu useassa vaiheessa:
- Kokoelma näytettä – näyte voi, tässä tapauksessa on määritelty solu – /kudos-organismin, että haluamme tehdä tutkimuksen. Näytteitä kerätään kahdentyyppisiä: terveitä soluja ja tartunnan saaneita soluja vertailua varten ja tulosten saamiseksi.
- mRNA – RNA: n eristäminen uutetaan näytteestä fenoli-kloroformin kaltaisella kolonnilla tai liuottimella. Uutetusta RNA: sta mRNA erotetaan jättäen jälkeensä rRNA: n ja tRNA: n., Koska mRNA: lla on poly-a-pyrstö, mRNA: ta sitovat pylväshelmet, joissa on poly-T-pyrstö. Uuttamisen jälkeen sarake huuhdellaan puskurilla mRNA: n eristämiseksi helmistä. Puskuri häiritsee hybridi joukkovelkakirjojen välillä mRNA ja helmiä häiritsevä pH-arvo.
- Luominen merkitty ekspressio – luoda ekspressio (täydentävät DNA strand), käänteinen transkriptio mRNA on tehty. Molemmat näytteet on sitten yhdistetty eri fluoresoiviin väriaineisiin fluoresoivien cDNA-säikeiden tuottamiseksi. Tämä auttaa erottamaan cdnas-järjestelmän näyteluokan.,
- Hybridisaatio – merkitty cDNAs sekä näytteet sijoitetaan DNA microarray niin, että jokainen ekspressio saa hybridisoitiin sen täydentäviä strand; ne ovat myös pestävä poistaa rajaton sekvenssit.
- Kokoelma ja analyysi
tietojen keruu on tehty käyttämällä microarray scanner. Skanneri koostuu laserista, tietokoneesta ja kamerasta. Laser kiihdyttää cDNA: n fluoresenssia ja tuottaa signaaleja.
Kun laser skannaa array, kamera tallentaa kuvia tuotetaan., Sitten tietokone tallentaa tiedot ja antaa tulokset heti. Näin tuotetut tiedot analysoidaan. Kunkin kohdan värien voimakkuuden ero määrittää geenin luonteen kyseisessä kohdassa.,kallista
- taulukot tarjoavat epäsuora mitta suhteellinen pitoisuus
- Erityisesti monimutkaisten nisäkkäiden genomit, se on usein vaikea suunnitella taulukot, jossa useita liittyvät DNA – /RNA-sekvenssit eivät sitoudu samalla koetin array
- DNA array voi havaita vain sekvenssit, että joukko oli suunniteltu havaitsemaan
kirjallisuutta
- Kaikki DNA-Sekvensointi-Sisältöä
- DNA: n Sekvensointi
- DNA-Sekvenssi Kokoonpano
- Suurikapasiteettisten DNA-Sekvensointi Tekniikoita
- Shotgun Sequencing