Rajoja ja Celland kehitysbiologia

Johdanto

Rasva-johdettu stroomasolujen (ASCs) ovat multipotent ja immunoprivileged, mikä tekee niistä ihanteellisia ehdokkaita terapeuttisia tarkoituksia varten (Bourin et al., 2013; Ma ym., 2014; Kallmeyer and Pepper, 2015). ASCs voidaan eristää käyttämällä invasiivisia tekniikoita eri rasvakudos varikot kehossa (Zuk et al., 2001)., Ne ovat ominaista niiden kyky noudattaa muovi, ainutlaatuinen pinta merkki, profiili ja kyky erilaistua luu -, rasva-ja rusto (Oikein et al., 2006; Bourin ym., 2013). ASCs käsittää ~15-30% rasvakudoksen (Bourin et al., 2013; Zuk, 2013), ja on laajennettava ex vivo, jotta saataisiin riittävästi solujen määrä terapeuttisiin tarkoituksiin.,

Tarjoamalla turvallinen ja säännelty cell therapy tuotteet potilaille edellyttää sitoutumista hyvä valmistus käytäntöjä (GMP), ja GMP-ohjeita tulee noudattaa koko prosessin eristäminen, laajentaa ja erottaa ASCs (Giancola et al., 2012). Lukuisat reagenssit, joita käytetään eristämään ja laajentaa ASCs tutkimustarkoituksiin ovat eläinperäisiä tai ei ole kliinistä-luokka; siksi nämä pitää korvata sopivampi vaihtoehtojen mukaan GMP standardien (Halme ja Kessler 2006; Riis ym., 2015)., Tarkistamme valinta seerumin ravintolisistä, joita voidaan käyttää ASC laajennus korvaa naudan sikiön seerumi (FBS), ja kuvata niiden vaikutukset in vitro-ja in vivo kuten raportoitu kirjallisuudessa.,

International Society of Cellular Therapy (ISCT) ja Kansainvälisen Rasvaa Sovellettu Teknologia Yhteiskunnassa (IFATS) Ohjeet ja Tekniikoita Käytetään Arvioimaan Rasvakudoksesta Peräisin Strooman Solun Ominaisuudet

joukko minimaalinen kriteereitä ja ohjeita on suositellut International Society of Cellular Therapy (ISCT) ja Kansainvälisen Rasvaa Sovellettu Teknologia Yhteiskunnassa (IFATS) varten luonnehdinta ASCs (Oikein et al., 2006; Bourin ym., 2013)., Nämä kriteerit ovat kyky ASCs kiinni muovi, niiden pinta merkki, profiili ja niiden trilineage eriyttäminen potentiaalia. Tuoreimmassa kannanotossa elinkelpoisuutta ja joukkotuhoaseiden lisääntymistä kuvataan lisämittauksina alkuperäisiin karakterisointikriteereihin. Lisäksi on määritelty kokeelliset menetelmät ja määritykset karakterisointikriteerien mittaamiseksi (Bourin et al., 2013)., Nämä kriteerit ovat osoittautuneet vaikuttaa lukuisia tekijöitä, kuten rasvaimu tekniikka, SVF eristäminen tekniikka ja media ja ravintolisistä käytetty laajennus prosessi (Koellensperger et al., 2014; Bajek et al., 2015; Busser et al., 2015). Mukaan ISCT ja IFATS ohjeita, se on ehdotettu ja hyväksytty, tutkimus-käytäntö vahvistaa noudattaminen edellä mainittujen suuntaviivojen kunkin eristäminen ja kulttuurin edellytys, jotta voidaan luokitella tuloksena solun väestön ASCs.,

Tekniikoita ja Menetelmiä Käytetään kuvaamaan ASCs

Morfologia ja Noudattaminen

Kun kylvetään, kiinnittynyt ASCs näyttää eri morfologia, joka voidaan kuvata ohut, pitkänomainen ja kara-muotoinen. Morfologinen arviointi ASCs on yleensä muotoon käyttämällä valon mikroskopia (Trojahn Kølle et al., 2013).

Leviämisen

ISCT ja IFATS suuntaviivat on suositeltavaa, että leviämisen ja taajuus kantaisä ACSs mitataan fibroblastoid colony-forming unit määritys (Bourin et al., 2013)., Muita tekniikoita käytetään tutkimuksissa mainittu tässä tarkastelussa käyttää laskenta eläviä soluja tai mittaamalla proliferatiivinen kapasiteetti ASCs käyttäen immunohistokemiaa. Laskenta menetelmiä ovat (1) laskemalla solut käyttäen elinkelpoisuuden väriaine ja hemocytometer, (2) laskemalla solut käyttämällä joko laskenta helmiä tai värjäystekniikoita ja flow cytometric analyysi ja (3) käyttäen kolorimetrisiä määrityksiä, jotka mittaavat elinkelpoisia soluja spektrofotometrillä (Gharibi ja Hughes, 2012; Trojahn Kølle et al., 2013; Bogdanova ym., 2014; Atashi ym., 2015; Johal et al., 2015; Oikonomopoulos et al., 2015).,

Immunophenotype

ISCT ja IFATS ohjeet on lueteltu ilmaus useita pinta markkereita ja niiden odotettavissa prosenttiosuudet kuin yrityksen vaatimus niiden kannanotto. He ovat myös suositelleet, että pintamarkkeriilmaisu mitattaisiin monivärisellä vasta-ainevärjäyksellä (Bourin et al., 2013). Tässä katsauksessa tehdyissä tutkimuksissa käytettiin virtaussytometristä analyysia pintamarkkeriilmaisun mittaamiseksi (Müller ym., 2006; Lindroos ym., 2009; Chieregato ym., 2011; Josh et al., 2012; Trojahn Kølle et al., 2013; Bogdanova ym., 2014; Patrikoski ym., 2014).,

Trilineage Eriyttäminen

Eriyttäminen osaksi rasva -, luu-ja rusto on perinteisesti mitattu histokemialliset värjäys tekniikoita visualisoida alle mikroskopia; kuitenkin, ISCT ja IFATS suuntaviivat on suositeltavaa, että laadullisten arviointien tulisi korvata tai täydentää määrällisiä lähestymistapoja, kuten mittaus-lineage-spesifisiä mRNA ilmaisun käyttämällä käänteinen transkriptio kvantitatiivinen polymeraasiketjureaktio (RT-qPCR) tekniikoita (Bourin et al., 2013)., Tekniikoita, joita on käytetty mittaamaan eriyttäminen kapasiteetti, kuvattu tutkimuksissa mainittu tässä tarkastelussa, ovat vaihdelleet histokemialliset värjäys, perinteisen PCR ja RT-qPCR. Histochemical värjäys tekniikoita ovat värjäystä solut joko (1) oil red O ja nile red adipogenesis; (2) Alizarin red S, alkalinen fosfataasi ja von Kossa varten osteogenesis; tai (3) Alcian sininen ja safranin varten chondrogenesis (Müller et al., 2006; Kocaoemer ym., 2007; Hebert ym., 2010; Rajala ym., 2010; Koellensperger et al., 2014; Oikonomopoulos et al., 2015; Riis et al., 2016).,

Seerumin Lisäravinteen

Naudan Sikiön Seerumi

FBS on perinteinen seerumin täydentää, jota käytetään solujen kulttuuria. FBS sisältää kasvutekijöitä (GFs) ja muut elementtejä välttämätöntä ASC-liite, laajennus -, huolto -, ja proliferaatiota in vitro (Lennon et al., 1995, 1996; Zuk et al., 2001; van der Valk et al., 2010). FBS on altis erien vaihtelu, xenoimmunization, ja mahdollinen saastuminen, jossa mykoplasma, virukset, endotoksiinit, ja prionit (van der Valk ym., 2004, 2010; Chieregato ym., 2011; Kyllonen ym., 2013; Jin et al., 2015)., Lähde ja laatu FBS voi vaikuttaa leviämisen ja erilaistumista ASCs, ja rutiini seulonta mycoplasma, endotoksiinit ja viruksia on tullut tärkeä (Naaijkens et al., 2012). Nämä tekijät voivat vaikuttaa kokeellisia tuloksia ja tehdä solun tuote vaarallinen kliiniseen käyttöön (Zuk et al., 2001; van der Valk et al., 2004; Witzeneder ym., 2013).

ASCs ovat immunoprivileged, puuttuu ilmaus major histocompatibility complex class II sekä T-ja B-solujen costimulatory molekyylejä (CD80, CD86-molekyyleihin, ja CD40)., In vitro immunogeenisuus ja immunosuppressiivisia ominaisuuksia ASCs ovat yleensä mitattu co-viljelyn, että ASCs kanssa perifeerisen veren mononukleaarisissa soluissa mixed lymfosyyttien reaktioita ja mittaus T-solujen proliferatiivinen vaste (McIntosh et al., 2006; Patrikoski ym., 2014). ASCs osoittaa, immunomodulatorisia ja immunosuppressiivisia ominaisuuksia, kuten osoituksena niiden kyky säädellä T-solujen toimintaa ja moduloida sytokiinien eritystä in vitro-ja in vivo (Leto Barone ym., 2013; Roemeling-van Rhijn ym., 2013; Patrikoski ym., 2014)., Nämä ominaisuudet johtuvat ASCs: n alhaisesta immunogeenisuudesta. Suurin osa ASC ja muut mesenkymaalisten kantasolujen (MSC) kliinisissä tutkimuksissa (faasi I, II, ja III) käyttää FBS täydentää media, ja se on raportoitu, että immunogeenisiä vaikutuksia on herättänyt, jonka osia FBS ihmisillä (Sundin et al., 2007; Riis et al., 2015). Esimerkiksi kliinisen lääketutkimuksen käyttäen luuytimestä peräisin Msc (BM-Msc: t) laajennettu FBS löytynyt vasta-aineita vastaan komponentit FBS (Horwitz et al., 2002)., Immuunivastetta FBS, kuten Arthus ja anafylaktiset reaktiot, on raportoitu kliinisissä tutkimuksissa, joissa potilaita hoidettiin dendritic soluja ja lymfosyyttien alttiina FBS (Selvaggi et al., 1997; Mackensen ym., 2000). Sen sijaan meta-analyysi MSC kliinisissä tutkimuksissa todettiin, että yli 75% kokeissa käytetty FBS niiden solun laajeneminen pöytäkirjat ja vain yksi tutkimus, seurataan ja osoittanut haittavaikutuksista FBS (Lalu et al., 2012)., In vivo-tutkimukset, joissa tutkitaan immuunivastetta hiirillä ASCs osoitti säilynyt immunosuppressio ja immunomodulaatio, alhainen immunogeenisuus, ja ei reaktiota FBS (Cho et al., 2009; González ym., 2009). Vaikka ASCs on testattu kliinisissä tutkimuksissa, niiden lopullinen käyttö terapeuttisena aineena on edelleen vahvistettava. Lisäksi käytetään prekliinisiä malleja, jotka eivät välttämättä ole biologisesti merkityksellisiä (Monsarrat ym., 2016). Lisäksi FBS voi olla hiirillä ja muissa eläinmalleissa vähemmän immunogeeninen kuin ihmisillä., FBS: n aikaansaama immuunivaste (Selvaggi ym., 1997; Mackensen ym., 2000; Horwitz ym., 2002) saattaa mahdollisesti vaikuttaa siirrettyjen solujen hylkimisreaktioon solupohjaisessa hoidossa.

Seerumittomat vaihtoehdot

FBS: n tuntematon ja määrittelemätön koostumus on merkittävä haitta. Parempi vaihtoehto olisi kemiallisesti määritelty väliaine, jonka koostumus on tunnettu, kuten kaupallisesti saatavilla oleva seerumista vapaa (sf) tai XF media (Usta et al., 2014)., Näiden seerumittomien väliaineiden oletetaan virheellisesti olevan vailla eläinperäisiä tuotteita, koska termejä SF ja XF käytetään usein vaihdellen. Kuitenkin, SF media on yleensä täydennetty eläinperäiset tai ihmisen seerumin albumiiniin ja GFs määrittelemätön määrät (Patrikoski et al., 2013). Xeno-ilmainen media, toisaalta, ovat kemiallisesti määriteltyjä media, joka sisältää hyvin määriteltyjä osia tiettyinä pitoisuuksina (Usta et al., 2014).

kasvutekijöitä

Toinen vaihtoehto seerumi on lisätty GFs kulttuuri-medium, joko erikseen, tai cocktail., Nämä GFs voivat olla synteettisiä, eläinperäisiä tai ihmisperäisiä. Korvaaminen synteettisellä GFs on edullista, koska niiden korkea laatu ja seurauksena standardointi erien välillä, mikä voi olla mahdollista, että eläin – tai ihmisperäisiä GFs. Yleisesti käytettyjä GFs: ää ovat fibroblastin kasvutekijä, epidermaalinen kasvutekijä ja verihiutalekasvutekijä (PDGF; Baer and Geiger, 2012; Ahearne et al., 2014). GFs: n lisääminen on liittynyt proliferaation lisääntymiseen (Hebert et al., 2010; Gharibi ja Hughes, 2012)., Parannettu adipogenic erilaistumista potentiaalia on aiemmin raportoitu ASCs laajeni GF täydennetään keskipitkän (Hebert et al., 2010). Kuitenkin, toisessa tutkimuksessa havaittu negatiivinen vaikutus adipogenic ja osteogeeninen eriyttäminen pitkällä aikavälillä viljellyt ASCs (Gharibi ja Hughes, 2012).

Seerumin Albumiini

Seerumin albumiini on runsaasti plasman proteiineihin, ja se voidaan eristää ihmiset ja eläimet. Usein SF media täydennetään seerumin albumiini., Tutkimuksissa verrattiin ihmisen seerumin albumiini ASC media ravintolisistä on löytynyt parantunut leviämisen, pienempi kara-kuten morfologia ja säilynyt eriyttäminen osaksi rasva -, luu ja rusto (Rajala et al., 2010; Johal et al., 2015).

Kemiallisesti Määritellyt XF Keskipitkän

Xeno-vapaa medium on suositeltu korvaava FBS ja seerumin, koska se sisältää tarvittavat komponentit ASC laajennus, ei liity luovuttajan tai erien vaihtelu, on GMP-yhteensopiva ja on minimaalinen immunogeenisuus ja suotuisa immunosuppressio (van der Valk ym., 2004, 2010; Usta et al.,, 2014). Verrattuna FBS, käyttö XF keskipitkän laajentamiseen ASCs on johtanut parempi morfologinen laatu, proliferaatiota, verrattavissa immunophenotype ja erilaistumista osaksi rasva -, luu ja rusto (Lindroos et al., 2009; Patrikoski ym., 2013; Oikonomopoulos et al., 2015). XF median käyttö ASC-laajennuksessa johtaa siihen, että ASCs menettää kykynsä kiinnittyä muoviin (Kyllonen ym., 2013; Patrikoski ym., 2013; Oikonomopoulos et al., 2015). Ylimääräinen pinnoite aineet ovat tarpeen ylläpitää luontainen ominaisuus muovi-noudattaminen liittyy ASCs., Kaupallisesti saatavilla XF medium on kallista ja valmistella talon XF keskipitkällä voi olla aikaa vievää ja saattaa lisätä riskiä erien vaihtelu (Lund et al., 2009; Baer ym., 2010; Rajala ym., 2010; Yang ym., 2012; Kyllonen ym., 2013; Patrikoski ym., 2013; Oikonomopoulos et al., 2015).

Ihmisen Vaihtoehtoja

Ihmisen vaihtoehtoja voi korvata FBS ja SF/XF täydentää media ja voi luoda kulttuuri ympäristö, joka tarkasti muistuttaa ihmisen ympäristö (Azouna et al., 2012; Koellensperger et al., 2014)., Lisäksi (samasta yksilöstä peräisin olevien) autologisten tuotteiden käyttö ei edellytä tarttuvien ja muiden tautia aiheuttavien aineiden testausta.

Ihmisen Seerumin

sen Jälkeen, kun koko veri on saanut hyytyä ilman antikoagulantti ja on sentrifugoitu, seerumi on saatu nestemäinen osa, joka ei sisällä verihiutaleet, valkosolujen tai punasolujen (Kuva 1; Stedman 2006). Ihmisen seerumin (HS) voi olla joko autologisen (luovuttaja ja vastaanottaja ovat sama henkilö) tai allogeeninen (johdettu henkilöitä, jotka ovat eri kuin vastaanottaja)., Sekä autologinen että allogeeninen HS ovat parempia kuin FBS (Stute et al., 2004; Bieback ym., 2009, 2012; Bernardo ym., 2011; Kyllonen ym., 2013; Patrikoski ym., 2013). ASCs laajeni HS on suurempi transcriptome vakautta kuin ne, laajennettu FBS, ottaa huomioon, että geenien vastuussa solun elinkaaren piteneminen, eriyttäminen ja soluväliaineen ja prostaglandiinisynteesin ovat upregulated ja yliekspressoituu FBS verrattuna HS käyttäen microarray-analyysi (Shahdadfar et al., 2005)., ASCs laajeni FBS saavuttanut vanheneminen nopeammin ja näytetään telomeerivasta lyhentäminen verrattuna ASCs laajeni HS (Shahdadfar et al., 2005). HS: n valinnalla ei näytä olevan juuri vaikutusta ASCs: n immuunivastetta sääteleviin ominaisuuksiin. ASCs laajeni joko allogeeninen HS tai FBS sisältää media oli alhainen immunogeenisuus ja johtanut immunosuppressio (Patrikoski et al., 2014). ASCs laajeni joko autologisen tai allogeenisen HS näyttää enemmän leviämisen ja erottaa immunophenotype verrattuna ASCs laajeni FBS (Josh et al., 2012; Bogdanova ym., 2014)., ASCs laajeni allogeenisen HS on eriytetty osaksi rasva -, luu-ja rusto, vaikka säätelyä chondrogenic ja osteogeeninen geenit oli suosinut verrattuna FBS (Josh et al., 2012). ASCs laajeni autologisen HS on eriytetty osaksi rasvakudoksen ja ruston; kuitenkin, kyky erilaistua luu oli vähemmän-suosi (Bogdanova et al., 2014). Autologisen HS voi tarjota ASCs paremmin leviämisen ja genomin vakautta määritettynä microarray-analyysi verrattuna allogeenisen HS (Shahdadfar et al., 2005; Bieback ym., 2009; Bernardo ym., 2011)., ASCs laajeni allogeenisessa HS: ssä tuli kasvupysähdys ja koki solukuoleman (Shahdadfar et al., 2005; Lindroos ym., 2009), joka rajoittaa allogeenisen HS: n mahdollisia etuja. Vaikka autologisen HS voisi olla ihanteellinen, sen saatavuus on rajallinen, ja siellä voi olla merkittävää vaihtelua potilaiden välillä kyky oman seerumin kasvun tukemiseen heidän omista soluista (Lange et al., 2007). Vaihtoehtoisesti, allogeenisen HS voidaan koota yhteen, jolloin saadaan suurempia määriä laboratorio kokeilu ja voi läpi tiukat laatu testaus veren pankki (esim.,, infektiolääkkeiden puuttumisen ja muiden verisolujen saastumisen testaus) ennen käyttöä ihmisillä(Bieback et al., 2009).

Plasma

Plasma on ei-huokoiset nestemäinen osa verta, joka sisältää vettä, elektrolyyttejä ja proteiineja (hyytymistä tekijät, fibrinogeeni, ja antikoagulantteja). Verihiutaleiden huono plasma (PPP), jääplasman (FFP), ja platelet rich plasma (PRP; Kuva 1) voidaan saada kokoverestä sentrifugoimalla eri nopeuksilla, ja myöhemmin varastointia eri lämpötiloissa. GF: n eritystä voidaan tehostaa aktivoimalla trombiinin kanssa verihiutaleita koko veressä ennen sentrifugointia (Doucet et al., 2005; Kocaoemer ym.,, 2007), mikä tehostaa plasmatuotteiden toimintaa.

Verihiutaleiden Huono Plasma

PPP on lähes ilmainen verihiutaleiden ja se on valmistettu koko veren lisäämällä antikoagulantti aikana kokoelma prosessi, jonka jälkeen plasma erotetaan käyttämällä nopeaa sentrifugointia (Kuva 1; Koellensperger et al., 2006). Tämä mahdollistaa verihiutaleiden ja punasolujen pelletoinnin. Tuloksena oleva PPP säilytetään 4°C: ssa, ja sitä kutsutaan tuoreeksi plasmaksi., PDGF erittyy yhdistämällä verihiutaleiden; kuitenkin vähäinen PDGF on julkaissut PPP seurauksena pieni määrä jäljellä verihiutaleita. Näin ollen julkisen ja yksityisen sektorin kumppanuuteen saattaa olla tarpeen lisätä GFs, kun sitä käytetään tiedotusvälineissä, kuten SF medium-valmistetta käytettäessä (Müller ym., 2006; Gottipamula ym., 2013). Käyttäen PPP-ilman lisäksi GFs on johtanut siihen, että pienempi leviämisen hinnat ja pienempi nousu DNA-synteesiä mitattuna käyttäen tymidiini-yhtiöittäminen, verrattuna HS: n ja FBS (Vogel ym., 1980; Koellensperger et al., 2006)., PPP, johon lisättiin GFs, lisäsi joukkotuhoaseiden lisääntymistä verrattuna HS: hen (Koellensperger et al., 2006); kuitenkin, nämä erot ovat voineet johtua eri tuotanto-protokollat PPP ja lisäksi eritasoisia GFs jokaisen PPP-valmistelut tässä tutkimuksessa. Laajennus ASCs PPP-tulokset parani leviämisen verrattuna FBS, ja on osteogeeninen eriyttäminen, joka on verrattavissa ASCs laajeni HS (Koellensperger et al., 2014)., Chondrogenic eriyttäminen oli vähentynyt ASCs laajeni PPP verrattuna ASCs laajeni PRP (Koellensperger et al., 2014).

jääplasman

FFP on saatu samalla tavalla kuin PPP, mutta se on jäädytetty suoraan erottelun jälkeen -18°C (O ’ Shaughnessy ym., 2004; Liumbruno et al., 2009). FFP: tä on käytetty BM-MSCs: n laajentamiseen positiivisin tuloksin., Nämä tulokset ovat paremmin leviämisen, immunosuppressiivinen toimintaa, ja adiposyyttien erilaistuminen ja osteocytes; ja immunophenotype ja morfologia, joka on verrattavissa solujen laajeni FBS (Müller et al., 2006; Mannello ja Tonti, 2007). FFP: n käyttö seerumin korvikkeena ASC-laajennuksessa vaatii kuitenkin lisätutkimuksia.

Trombosyyttirikas Plasma

PRP on verihiutaleisiin rikastunut veren osuus. PRP on valmistettu erottamalla plasma alkaen punasoluja hitaammin sentrifugointi nopeuksilla, joka estää rakeistettaessa ja verihiutaleiden (Kuva 1)., ASCs laajeni PRP säilyttää klassinen immunophenotype ja morfologia, ja PRP kasvaa leviämisen verrattuna FBS (Kocaoemer et al., 2007; Chieregato ym., 2011; Atashi ym., 2015). ASCs laajeni PRP on parantunut eriyttämisen tehokkuutta kohti adipogenic ja osteogeeninen suvusta, kun ottaa verrattavissa tehokkuutta chondrogenic eriyttäminen, verrattuna ASCs laajeni FBS (Kocaoemer et al., 2007; Chieregato ym., 2011). Verrattuna, HS todettiin olevan hieman parempi kuin PRP kannalta eriyttäminen ja leviämisen ASCs (Kocaoemer et al.,, 2007; Chieregato ym., 2011). PRP on huonosti määritelty kulttuuri keskipitkällä täydentää, koska sen korkea biologinen vaihtelu ja monimutkainen uuttomenetelmä, jossa puhdistava verihiutaleiden tekijä-rikas supernatantti plasmasta kalvoja voi olla vaikeaa. PRP: n käyttöä rajoittavat suuret määrät kokoverta, joita tarvitaan riittävän PRP: n tuottamiseen kokeisiin (Chieregato ym., 2011).,

Verihiutaleiden Lysate

Ihmisen verihiutaleiden lysate (HPL) sisältää verihiutaleiden GFs, jotka on saatu lysing verihiutaleiden keskittynyt pieni määrä plasmassa (verihiutaleiden tiivisteet; Kuva 1), jonka lämpötila shokki. HPL sisältää suuremman GFs-pitoisuuden kuin muut seerumin korvikkeet, mukaan lukien ihmisen PRP ja FBS (Doucet et al., 2005; Bernardo ym., 2006, 2011; Bieback ym., 2009; Schallmoser ym., 2010)., HPL voi helposti olla saatu ja tuotettu afereesi tuotteita ja buffy takit, ja voi sekoitettava joko PRP-tai lisäaine ratkaisu (Schallmoser ja Strunk, 2013; Iudicone et al., 2014). HPL: ää tuotetaan jäädyttämällä verihiutaleita -30 – – -80°C: ssa 24 tunnin ajan, minkä jälkeen se sulatetaan ja sentrifugoidaan. Toistuva jäädyttää, sulattaa ja sentrifugoidaan syklit mahdollistavat julkaisun GFs ja poistaminen verihiutaleiden elinten (Bernardo et al., 2006; Schallmoser ym., 2007)., Toinen HPL-lisäravinteen hyöty on se, että verihiutaleita voidaan käyttää 4-5 päivän viimeisen käyttöpäivämäärän jälkeen (Bieback et al., 2009). HPL on parempi vaihtoehto kuin autologisen ja allogeenisen HS, kuin ASCs laajeni HPL säilyttää klassinen immunophenotype, eriyttäminen, clonogenic hyötysuhde, kennon puhtaus, ja solujen elävyys (Trojahn Kølle et al., 2013; Riis et al., 2016). HPL tukee myös pitkäaikaista laajentumista vaarantamatta ASCs: n immunomodulatorisia ominaisuuksia flow cytometric analysis (Bieback et al., 2009)., Laajennus HPL tuloksia lyhyemmässä populaation kaksinkertaistumisaika, vähentää aikaa tarvitaan solun laajeneminen ja alentaa uhka vanhenemista ja muutosta (Doucet et al., 2005; Shahdadfar et al., 2005; Bernardo ym., 2006, 2011; Azouna ym., 2012). Bio-turvallisuus HPL on arvioitu käyttäen array vertaileva genomien hybridisaatio ja korkea herkkyys spektrin karyotyping, jossa todettiin, että ASCs laajeni HPL ei ollut kromosomipoikkeavuuksien (Crespo-diaz et al., 2011; Trojahn Kølle et al., 2013)., Klassinen ASC morfologia (ohut, pienempi, pitkänomainen, ja kara-muotoinen) on voimassa, HS: n ja HPL, kun taas ASCs laajeni FBS ovat suurempia ja vähemmän kara-muotoinen (Trojahn Kølle et al., 2013). Vaikka tämä voi osoittaa, että sekä HS että HPL valitsevat primitiiviset / epäkypsät ASCs (Doucet et al., 2005; Bieback ym., 2009), se viittaa myös siihen, että solut kasvanut FBS on vähentänyt leviämisen ja edetä nopeasti kohti vanhenemista. HPL vaihtelee yksilöiden välillä (Bernardo et al., 2006; Crespo-diaz ym., 2011), ja erien vaihtelu vähenee HPL: n yhdistyessä (Schallmoser et al.,, 2007; Trojahn Kølle et al., 2013). Lisäksi yhdistämällä monet avunantajat, suuri määrä voidaan saada lisäravinteen, mikä tekee HPL parempi PRP (Kocaoemer et al., 2007; Bieback ym., 2009; Chieregato ym., 2011).

päätelmä

Riis et al. kaikista rekisteröidyistä kliinisistä lääketutkimuksista, käyttäen laajennettu ASCs, jotka on lueteltu niiden laajentamisen edellytykset, suurin osa käyttää FBS, kolme tutkimuksissa käyttää autologista HS, yksi oikeudenkäynti käyttää PRP, ja yksi tutkimus käyttää HPL (Riis ym., 2015)., Nämä tilastot ovat hälyttäviä, koska FBS on mahdollista lähettää zoonoosit seuraavasti solujen siirto, ja immuunijärjestelmän reaktioita vastaan FBS osia on raportoitu (Selvaggi et al., 1997; Mackensen ym., 2000). FBS on ei-GMP-yhteensopiva tuote, koska se vaikuttaa turvallisuutta ja tehoa ASC terapeuttista, ja näin ollen korvattava (van der Valk ym., 2004; Kyllonen ym., 2013; Witzeneder ym., 2013). Tämä on korjattu korvaamalla FBS kemiallisesti määritellyt ihmisen johdettu vaihtoehtoja., Muuttumassa FBS ihmisten vaihtoehtoja tai XF/SF media regeneratiivisen lääketieteen on tärkeä etu, että ASCs lisääntyvät paljon nopeammin jälkimmäisessä, jolloin suurempi määrä soluja elinsiirtoon lyhyemmässä ajassa. Eri kulttuurimedioiden suhteellisesta paremmuudesta kiistellään kuitenkin edelleen laajasti. Tutkimukset, joissa vertaillaan useampaa kuin yhtä viljelyainetta, ovat raportoineet vaihtelevia tuloksia (Lange et al., 2007; Bernardo ym., 2011; Koellensperger et al., 2014; Riis et al., 2016). Koellensperger ym., verrattuna trilineage eriyttäminen ASCs laajeni FBS, PRP, PPP, ja HS (Koellensperger et al., 2014). Niiden tulokset osoittivat, että jokainen kulttuuriväline mahdollisti eriyttämisen yhdeksi tai useammaksi linjaksi, mutta ei koskaan kaikille kolmelle linjalle. Kun XF media, FBS ja HPL täydennetty media vertailtiin, Riis et al. todettiin, että tietyt alaryhmät ilmaisi ominaispinta-markkereita kulttuurista riippuen keskipitkän hyödyntää (Riis ym., 2016)., Tutkimukset, joissa verrattiin immunophenotype ja ASCs laajeni FBS-ja muut kulttuuri media, löytyy vähän eroa solun pinnalla merkki ilmaisu, riippumatta siitä, markkereita tutkittu (Taulukko 1). Kylvö tiheys, hapen jännitys, konfluenttisuuden, dissosiaatio, ja valinta pohjapinta media voi vaikuttaa myös kokeellisia tuloksia (Sotiropoulou et al., 2006; Freshney, 2010; Bourin ym., 2013; Inamdar ja Inamdar, 2013; Feng et al., 2014; Riis et al., 2015)., Valinta elatusaine riippuu loppupään sovellus näiden solujen (hallinto eriytetty tai jaksottamattomat ASCs) ja hoidettavan. Lisäksi, immunogeenisuutta elatusainetta käytetään laajentaa soluja ennen kliinistä hakemus olisi pidettävä parametri, joka voi vaikuttaa hoitotulokseen. Useimmissa eri kulttuurivälineitä vertailevissa tutkimuksissa käytettiin ISCT: n ja IFATS: n määrittelemiä kriteerejä, joilla validoitiin vaihtoehtoisen FBS: n käyttö., Useimmat näistä tutkimuksista tarkastelee ASC morfologia, joukkotuhoaseiden leviäminen, immunophenotype, ja kyky nämä solut eriyttää pitkin osteogeeninen, chondrogenic, ja adipogenic suvusta eri kulttuuri media. Harvat tutkimukset ovat tutkineet muiden näkökohtien ASCs, kuten vanheneminen, geneettinen stabiilius, transcriptome, proteome, immunogeenisuus, sytokiinien eritystä, ja solusyklin (Shahdadfar et al., 2005; Bieback ym., 2012). Vaikka ISCT-ja IFATS-kriteerit olivat yritys yhtenäistää kenttä standarditoimintamenettelyjen osalta (Dominici ym., 2006; Bourin ym., 2013), ei ole yksimielisyyttä, jonka ympärille ominaisuuksia ASCs ovat merkityksellisiä kliinisissä tutkimuksissa, joten vertailua eri kulttuuri media lähes mahdotonta. Vaikka nämä kriteerit tarjoavat mitattavissa olevia tuloksia helpoksi vertailuksi, ASC-lopputuotteiden turvallisuuteen, tehokkuuteen ja toistettavuuteen voi olla erilaisia vaikutuksia Liitännäisjärjestelmien laajentamiseen käytettävien komponenttien vaihtamisella. Tarkasteltaessa muutoksia transcriptome, proteome, ja secretome ja ASCs laajentaa eri kulttuuri media on tärkeä, koska on käyttää solujen laajennettu vaihtelevissa olosuhteissa asianmukaisia prekliinisissä malleissa.,

Kirjoittaja Maksut

CD käsitteellistää ja joka on laadittu uudelleen, ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus. MP avusti tarkastelun konseptoinnissa, tarkisti ja hyväksyi lopullisen käsikirjoituksen. MSP avusti tarkastelun suunnittelussa, muokkasi ja hyväksyi lopullisen käsikirjoituksen sekä nosti kyseisten hankkeiden rahoitusta. Kaikki kirjoittajat ovat lukeneet ja hyväksyneet lopullisen käsikirjoituksen.,

Rahoitus

Tämä tutkimus ja julkaisuun on seurausta rahoituksesta, Medical Research Council Etelä-Afrikassa vuonna ehdot (a) MRC on Lippulaivoja Palkintoja Hankkeen SAMRC-RFA-UFSP-01-2013/KANTASOLUJA sekä (b) Extramural Yksikkö Kantasolujen Tutkimus ja Hoito. Rahoitusta antoi myös Etelä-Afrikan kansallinen tutkimussäätiö.

eturistiriita Lausunto

kirjoittajat ilmoittavat, että tutkimus on tehty ilman mitään kaupallisia tai taloudellisia suhteita, jotka voitaisiin tulkita mahdollisia eturistiriitoja.,

Kiitokset

tekijät haluavat kiittää Tohtori Cheryl Tosh hänen toimitussihteeri.

Stedman, T. L. (2006). Stedmanin lääketieteellinen sanakirja. Philadelphia, PA: Lippincott Williams & Wilkins.

Google Scholar